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    新手如何爬大板?制備薄層色譜純化操作流程

    嘉峪檢測網        2024-05-30 09:00

    制備薄層色譜(Prep TLC)是一種非常實用的用于少量樣品純化的技術。PTLC可以快速分離反應體系混合物中的多種組分,因此對于獲得試驗反應產物或天然提取物組分的分離尤其有用。 此技術需要多次實踐才能熟練掌握,新手一定要向實驗室里師兄師姐多請教。 

    常見制備板尺寸: 20cm × 20cm, SiO2厚度0.25 mm。 難分離樣品載量: 10-25mg;較難分離樣品載量:25-50mg;易分離樣品載量: 50- 90mg。 國內很多廠家的制備板厚度可以到1mm,板越厚載樣量越大。

     

    制備薄層色譜(PTLC)操作流程:上樣--展開--檢測--刮板--洗脫

     

    樣品要求:因為硅膠板是弱酸性的,對酸不穩定的化合物盡量避免爬大板;對空氣,水,有機溶劑穩定; 低沸點的溶劑里要好溶;最好有紫外吸收;極性不能太大(至少展開劑能爬起來)。

     

    上樣:盡量少的溶劑溶解樣品,最好是易揮發的,二氯甲烷最常用,如果不溶可以加幾滴甲醇促溶??梢杂靡淮涡缘喂苋藁ê蠹舫擅P狀上樣,每個人的辦法都不同,小編就是這么弄的,順便練練毛筆字。上樣時也最好像寫毛筆字一樣一氣呵成,這樣跑出來的帶比較均勻。如樣品溶液太多需要上兩遍樣,先用吹風機吹干溶劑后再上樣。通常情況下,每塊20X20的大板上樣量:40-60mg; 如果反應比較雜的話,可適當減少上樣量;上樣的樣品帶距離兩端大約1cm, 距離底邊大約2-3cm,總之控制樣品帶的高度一定要高于展開缸中展開劑的高度。

     

    展開:展開之前,一定將溶劑吹干或晾干,否則會導致色帶的形狀不規則。展開劑的選擇,先用小板爬樣,選到合適的展開劑后,配好溶劑爬大板,由于大板和小板由細微的差別,大板展開劑的極性可以稍微比小板展開劑的極性大一點,一樣的話也問題不大。跑板最好要跑到快頂端1cm左右,充分展開樣品,切記不要跑過,跑過的話,極性小的點可能會被展開劑沖都一起,而極性大的點雖然不會沖到上面,但會變散,不容易判斷色帶的邊緣。

    另外,如果上樣的色帶較寬或者不規則,可以在展開之前提前利用大極性溶劑預展開2-3cm,將寬色帶壓縮成窄帶,然后拿出來重新吹干,然后再正常展開。

    展開時,和爬小板類似,要保持展缸內較高的蒸汽壓,最好用重物壓緊展缸蓋。如果展缸有裂紋的話,二氯甲烷甲醇體系千萬不要用,石油醚乙酸乙酯體系可以考慮,總之效果都不好。

    如果一次展開后,發現分離效果不佳,可以考慮吹干后重復展開。

     

    檢測:產品的判斷,通過極性大致判斷哪幾個色帶可能是產品,然后每個色帶可以先刮一點,碾碎,加甲醇溶解,過濾送LCMS檢測判斷。

    能爬大板的樣品一般是有紫外吸收的化合物,這樣可以準確判斷產物的準確位置并取得較好的純化效果。沒有紫外吸收的化合物也可以爬大板,但是得到產物的純度全靠運氣了!建議使用微量柱層析純化。無紫外吸收的樣品可以參照以下方法盲刮,我們將制備板的一側進行部分顯色,活用玻璃刀將TLC板分割下小部分,通過部分的顯色情況,來反推整塊板的顯色情況,所以相對的對板的展開效果的要求比較高,如果爬的色帶不規則,那很難得到純的產物。

    其實不用切割下來,也可以顯色,利用滴管在板邊緣涂顯色劑,然后顯色,效果也可以。

    產物色帶的判斷:如果有標樣點的話,可以跟標樣點TLC檢測對照;如果沒有標樣點的話可以將TLC—LCMS或NMR組合判斷;有時在大板展開后,可能會出現像下方第3塊板的情況,兩條色帶距離特別近,不好判別是不是一個東西,造成這種狀況的原因可能是過載或受潮,建議大家將兩條色帶分別刮取后與標點對照來展開判斷是不是一個東西,再確定能不能合并。

    刮板:判斷好色帶后,在紫外燈下,用鉛筆描好熒光帶,開始刮板。帶好口罩很重要,小編是用平頭雕刻筆刀刮板的,非常好用。另外非常重要的是,在確定得到所需產物之前,不要輕易丟棄制備板。

     

    洗脫:刮好的硅膠,量少的話,可以隔著稱量紙用試管搟碎。量多的話,直接裝到自封袋里面隨便蹂躪,直到成粉末為止。粉末狀的硅膠樣品的洗脫,大部分人是直接加溶劑泡出來。但小編用的是,把硅膠粉直接裝到柱子(有底層砂芯的那種)里,上層鋪一薄薄的石英砂,直接像過柱子一樣在上層加溶劑壓出來,這種方法的好處就是,對于溶解性不好的樣品也可以用相對較少的溶劑洗快速洗出產品。加入溶劑洗脫的時候可以隨時點板看產品是否已經完全洗出。盡量選擇溶解度好并且極性小的溶劑,通??捎枚燃淄榛蛘咭宜嵋阴?,如果化合物溶解度較差時,也可選用二氯甲烷:甲醇10:1的混合溶劑進行洗脫,防止溶解過多硅膠,洗脫劑避免加入過多的甲醇。

     

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    來源:有機合成

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