<button id="rrd2y"><acronym id="rrd2y"></acronym></button>

  • <strong id="rrd2y"><track id="rrd2y"></track></strong>
  • 您當前的位置:檢測資訊 > 科研開發

    創新藥反相液相有關物質方法開發通用流程

    嘉峪檢測網        2024-04-23 14:42

    反相有關物質方法開發時,一般是基于建立一套方法對有關物質進行控制的原則,本文主要針對具有一定疏水性和極性化合物進行有關物質方法開發,故強極性化合物有關物質方法開發不在本文討論范圍內。

    創新藥研發周期長,涉及多個化合物(起始物料、中間體和成品等)有關物質方法開發,且創新藥的工藝路線隨著研發進程處于持續優化狀態,因此需要不斷更新雜質控制方法,有關物質方法開發任務量可見一斑,而創新藥幾乎很難查詢到可供參考的色譜方法信息。為了在有限的時間內保質保量完成方法開發工作,起到快速助力原料藥工藝路線開發與優化的目的,進一步優化人員和資源的分配,提高方法開發效率和整體質量研究水平,建立一套通用的方法開發流程至關重要。

    研發初期因質量研究人員所能獲知的化合物信息有限,雜質結構信息(一般工藝路線處于保密狀態)未知;而在研發中后期才有可能獲取該信息,故本文將有關物質方法開發流程分為這兩部分分別進行闡述。

    化合物水溶性較差時首選C18色譜柱,化合物水溶性較大時(如疏水性較大的氨基酸類)首選極性嵌入色譜柱,色譜柱孔徑一般選擇80A-130A(分子量<2000時)。

    A-E類均為耐寬pH范圍的C18色譜柱,其中A類為中等疏水性C18色譜柱;B類與A類不相似,疏水性存在差異(根據Eureby色譜柱性能評估參數:CDF>1或根據PQRI Database:F>3,B類疏水性略高于A類);C類色譜柱為高密度鍵合C18官能團,適用于疏水異構體或類似物分離;D類固定相帶正電荷,可以改善堿性化合物峰形(若要兼顧分離和峰形,也可考慮使用普通色譜柱,在流動相中加入離子對/離液劑),增加酸性化合物保留;E類為核殼柱或表面多孔柱,可提高化合物柱效和靈敏度。

    F、G與H類為極性嵌入色譜柱(可兼容100%水相),在中、低pH流動相條件下這三類色譜柱對極性和疏水性化合物的選擇性存在差異(疏水性順序:G>F>H,故G類可以兼顧疏水和極性跨度較大的化合物,F和H適合疏水性不高或具有一定立體選擇性的化合物,如環肽藥物;立體選擇順序:F>H;F與H固定相均鍵合酰胺基團,具有氫鍵作用:H>F);F類適用于堿性極性化合物保留和峰形改善,pH耐受范圍2-11;G和H類pH耐受范圍2-8;極性嵌入色譜柱可搭配含離液試劑的流動相以增強極性化合物保留,同時避免疏水化合物過度保留。

    圖1注釋:

    1. 為了提高在方法開發時色譜柱的篩選效率,建議適時歸類整理耐寬pH范圍的可及性色譜柱,即使篩選時暫時無法獲得此類色譜柱,也可選擇其他相似色譜柱(F<3或CDF<1,可通過以下兩個網址進行查詢:https://apps.usp.org/app/USPNF/columnsDB.html和https://www.acdlabs.com/resources/free-chemistry-software-apps/column-selector/)。

    2. 首選耐寬pH范圍的色譜柱,可以避免流動相pH更換時色譜柱不耐受低pH和高pH的情況,同時可有效節省更換色譜柱帶來的沖柱和過渡時間,進一步提高流動相篩選效率。

    3. 流動相pH選擇在化合物信息未知的情況下建議從低pH依次篩選至高pH條件(通過分離度和峰形等綜合評估流動相適宜的pH),同時需兼顧化合物在酸性或堿性條件下的穩定性(溶液穩定性考察可初步判斷)和化合物酸堿性:在低pH下時C18色譜柱固定相的離子作用最弱,當待分析物為堿性化合物時,由離子作用造成的峰形差的可能性會大大降低;當待分析物為酸性化合物時,化合物以電中性形式存在也可提高疏水性,有助于分離;流動相選擇其他pH主要基于化合物帶電性能即pKa,如當以離子化形式存在的化合物間不能有效分離時,可通過改變流動相pH使離子化分析物呈電中性,提高疏水性進而改善分離。

    4. 在化合物檢測波長信息未知前提下,有機相首選乙腈主要基于該溶劑紫外截止波長在200nm以下,水相用于調節pH的添加劑或緩沖鹽建議選擇紫外截止波長較低的試劑/試藥(若待分析物間的分離對流動相pH不敏感時,流動相pH是否處于緩沖鹽緩沖范圍內不是必需:如當流動相pH為4.5時,緩沖鹽為磷酸鹽也是可行的,此時磷酸鹽的作用主要是為了改善峰形);當分離存在風險時,需篩選有機相體系,如甲醇或乙腈+甲醇體系。

    如何從成百上千根色譜柱中篩選出適合不同化合物分析的色譜柱,本文給出了一定參考。按照上述有關物質反相方法開發流程,可以提升研發人員的色譜柱篩選能力(特別適合新手小白),不僅提高了方法開發效率,降低成本的同時,還提升了整個團隊的研發水平。

    分享到:

    來源:藥研

    天天躁日日躁狠狠躁欧美老妇AP_日本四级视频网站_国产精品女人视频免费_日本中文字幕乱码在线高清
    <button id="rrd2y"><acronym id="rrd2y"></acronym></button>

  • <strong id="rrd2y"><track id="rrd2y"></track></strong>